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装柱的方法有湿法和干法两种。
将吸附剂用洗脱剂中极性最低的洗脱剂调成糊状，在柱内先加入约34柱高的洗脱剂，再边敲打柱身边将调好的吸附剂倒入柱中，同时打开柱子的下端活塞，在色谱柱下面放一个干净并干燥的锥形瓶，接收洗脱剂。
当装入的吸附剂有一定的高度时，洗脱剂流下速度变慢，待所用吸附剂全部装完后，用流下来的洗脱剂转移残留的吸附剂，并将柱内壁残留的吸附剂淋洗下来。
在此过程中，应不断敲打色谱柱，以使色谱柱填充均匀并没有气泡。
柱子填充完后，在吸附剂上端覆盖一层约0.5cm厚的石英砂或覆盖一片比柱内径略小的圆形滤纸[1]。
在整个装柱过程中，柱内洗脱剂的高度始终不能低于吸附剂最上端，否则柱内会出现裂痕和气泡。
（２） 干法装柱
在色谱柱上端放一个干燥的漏斗，将吸附剂倒入漏斗中，使其成为细流连续地装入柱中，并轻轻敲打色谱柱柱身，使其填充均匀，再加入洗脱剂湿润。
也可先加入34的洗脱剂，然后倒入干的吸附剂。
由于氧化铝和硅胶的溶剂化作用易使柱内形成缝隙，所以这两种吸附剂不宜用于干法装柱。
如果装柱时吸附剂的顶面不呈水平，将会造成非水平的谱带，如图249（b）所示；若吸附剂表面不平整或内部有气泡时会造成沟流现象（谱带前沿一部分向前伸出），如图250所示。
所以，吸附剂要均匀装入管内，装柱时要轻轻不断地敲击柱子，以除尽气泡，不留裂痕，防止内部造成沟流现象，影响分离效果。
但不要过分敲击，否则太紧密而流速太慢。
图249水平的和非水平的谱带前沿的对比图250沟流现象5. 加样及洗脱
**样品可以直接加到色谱柱中，如浓度低可浓缩后再进行分离。
固体样品应先用少量的溶剂溶解后再加到柱中。
在加入样品时，应先将柱内洗脱剂排至稍低于石英砂表面后停止排液，用滴管沿柱内壁把样品一次加完。
在加入样品时，应注意滴管尽量向下靠近石英砂表面[2]。
样品加完后，打开下旋塞，使**样品进入石英砂层后，再加入少量的洗脱剂将壁上的样品洗脱下来，待这部分**的液面和吸附剂表面相齐时，即可打开安置在柱上装有洗脱剂的滴液漏斗的活塞，加入洗脱剂，进行洗脱。
洗脱剂的流速对柱色谱分离效果具有显著影响。
在洗脱过程中，样品在柱内的下移速度不能太快，否则混合物得不到充分分离；如果洗脱剂的流速控制得较慢，则样品在柱中保留的时间长，各组分在固定相和流动相之间能得到充分的吸附或分配作用，从而使混合物，尤其是结构、性质相似的组分得以分离。
但样品在柱内的下移速度也不能太慢（甚至过夜），因为吸附剂表面活性较大，时间太长有时可能造成某些成分被破坏，使色谱带扩散，影响分离效果。
因此，层析时洗脱速度要适中。
若洗脱剂下移速度太慢可适当加压或用水泵减压，以加快洗脱速度，直至所有色带被分开。
如果样品中各组分都有颜色时，可根据不同的色带用锥形瓶分别进行收集，然后分别将洗脱剂蒸除得到纯组分。
但大多数有机物质是没有颜色的，只能先分段收集洗脱液，再用薄层色谱或其他方法鉴定各段洗脱液的成分，成分相同者可以合并。
三、仪器与试剂
1． 仪器
玻璃漏斗、玻璃棒、滴管、滴液漏斗、锥形瓶、烧杯、层析柱（20mm×300mm）、旋转蒸发仪。
2. 试剂
95％乙醇、中性氧化铝（100～200目）、荧光黄碱性湖蓝BB乙醇溶液。
四、实验步骤
荧光黄和碱性湖蓝BB均为染料，由于它们的结构不同、极性不同，吸附剂对它们的吸附能力不同，洗脱剂对它们的解吸速度也不同。
极性小、吸附能力弱、解吸速度快的碱性湖蓝BB先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解吸速度慢的荧光黄后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。
1． 装柱
将层析柱（20mm×300mm）洗净干燥后垂直固定在铁架台上，取少许脱脂棉放于干净的色谱柱底，用长玻璃棒将脱脂棉轻轻塞紧，在脱脂棉上覆盖一层厚0.5cm的石英砂，色谱柱下端置一锥形瓶。
关闭柱下部活塞，向柱内倒入95％乙醇至柱高的34处，打开活塞，控制乙醇流出速度为每秒钟1～2滴。
然后将用乙醇溶剂调成糊状的一定量的吸附剂中性氧化铝（100～200目）通过一只干燥的粗柄短颈漏斗从柱顶加入，使溶剂慢慢流入锥形瓶。
填充吸附剂的过程中要敲打柱身，使装入的氧化铝紧密均匀，顶层水平。
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