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二、实验原理
薄层色谱（Thiography，缩写为TLC），又称薄层层析，是快速分离和定性分析微量物质的一种重要的实验技术，具有设备简单、操作方便而快速的特点。
它是将固定相支持物均匀地铺在载玻片上制成薄层板，将样品溶液点加在起点处，置于层析容器中用合适的溶剂展开而达到分离的目的。
可用于精制样品、化合物鉴定、跟踪反应进程和柱色谱的先导（即为柱色谱摸索最佳条件）等方面。
薄层色谱也可以分离较大量的样品（可达几百毫克），特别适用于挥发性较低、或在高温下易发生变化而不能用气相色谱进行分离的化合物。
薄层层析按分离机制不同可分为吸附薄层层析、分配薄层层析、离子交换薄层层析等，最常用的为吸附薄层层析，在此主要讨论。
吸附薄层层析中样品在薄层板上经过连续、反复地被吸附剂吸附及展开剂解吸附过程，由于不同的物质被吸附及被解吸的能力不同，故在薄层板上以不同速度移动而得以分离。
通常用比移值（Rf值）表示物质移动的相对距离，如图247所示：
Rf=色斑最高浓度中心至原点中心的距离a展开剂前沿至原点中心的距离b
图247Rf值计算示意图
1. 起点线2. 展开剂前沿
a.色斑最高浓度中心至原点中心的距离;b.展开剂前沿至原点中心的距离物质的Rf值随化合物的结构、薄层板、吸附剂、展开剂的性质以及温度而变化，但在一定条件下每一种化合物的Rf值都为一个特定的数值。
故在相同条件下分别测定已知和未知化合物的Rf值，再进行对照，即可确定是否为同一物质。
下面介绍薄层色谱的操作规程。
1. 吸附剂的选择
一种合适的吸附剂应该具备的条件是：① 它能够可逆地吸附被层析的物质；② 它不会引起被吸附物质的化学变化；③ 它的粒度大小应该能使展开剂以合适的速率展开。
此外，吸附剂最好是白色或浅色的。
最常用的吸附剂是硅胶和氧化铝，其颗粒的大小对层析速率、分离效果均有明显的影响。
颗粒太大，其总表面积则相对小，吸附量降低，展开速率快，层析后组分的斑点较大，不集中，分离效果不好；反之颗粒太小，层析速度太慢，各组分分不开，效果也不好。
一般干法铺层所用的硅胶和氧化铝颗粒大小为150～200目较合适；湿法铺层则要求200目以上。
① 硅胶：硅胶是无定形多孔物质，略具酸性，适用于酸性和中性物质的分离和分析，薄层色谱用的硅胶分为以下几种：
硅胶H——不含黏合剂；
硅胶G——含黏合剂（煅石膏2CaSO4·H2O），标记G代表石膏（gypsum）；
硅胶HF254——含荧光物质，可在波长254nm的紫外光下发出荧光；
硅胶GF254——既含黏合剂，又含荧光剂。
黏合剂除煅石膏外，还有淀粉、聚乙烯醇和羧甲基纤维素钠（CMC）。
使用时，一般配成水溶液。
如羧甲基纤维素钠的质量分数一般为0.1％～0.5％，淀粉的质量分数为5％。
② 氧化铝：氧化铝也分为氧化铝G、氧化铝HF254及氧化铝GF254。
氧化铝的极性比硅胶强，适用于分离极性小的化合物。
2. 薄板的制备和活化
薄板的制备方法有两种：一种是干法制板；另一种是湿法制板。
① 干法制板：一般用氧化铝作吸附剂，涂层时不加水，将氧化铝倒在玻璃板上，取直径均匀的一根玻璃棒，将两头用胶布缠好，在玻璃板上滚压，把吸附剂均匀地铺在玻璃板上。
这种方法简便，展开快，但是样品展开点易扩散，制成的薄板不易保存。
② 湿法制板：是实验室最常用的制板方法。
选用一定规格的玻璃板[1]，用肥皂水洗净，用蒸馏水淋洗两次后烘干，用时再用酒精棉球擦除手印至对光平放无斑痕。
在洁净的50mL研钵中加8mL 1％羧甲基纤维素钠的水溶液，然后一边分批放入3g硅胶GF254，一边充分研磨[2]，使浆料搅成均匀的糊状。
用吸管或玻璃棒迅速将浆料涂于上述洁净的载玻片上，用食指和拇指拿住玻片，作前后左右摇晃摆动，使流动的硅胶GF254均匀地平铺在载玻片上。
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