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硅胶GF254、0.5%羧甲基纤维素钠水溶液、石油醚、乙酸乙酯、乙醇、氯仿、对硝基苯胺、邻硝基苯胺。
四、实验步骤
邻硝基苯胺和对硝基苯胺[5]的薄层色谱。
用1％羧甲基纤维素钠水溶液和吸附剂硅胶GF254制备浆料铺板，薄板干燥、活化后备用。
将邻硝基苯胺和对硝基苯胺及它们的混合物分别用无水乙醇溶解，配制成约0.1％的浓度后点样，每块薄板上点两个样点，距离约１cm。
将展开剂氯仿[6]加入层析缸中，盖上盖子，3～5min后形成饱和蒸汽状态，将薄板斜放层析缸中展开。
展开剂到薄板上端约0.5cm时取出，晾干，直接观察或经紫外分析仪显色后观察斑点。
测量，计算比移值Rf。
【注释】
[1] 制板常用2.5cm×7.5cm的玻璃片。
目前有市售已铺好的薄板供应。
[2] 薄板制备的好与坏直接影响色谱的分离效果，在制备过程中应注意以下几点：① 涂层浆料要制成均匀而又不带块状的糊状，在研钵中搅拌比在烧杯中效果更佳；② 铺板前一定要将玻璃板洗净、擦干；③ 涂布速度要快；④ 铺板时，涂层厚度（0.25～１mm）要尽量均匀，不能有气泡、颗粒等。
否则，在展开时溶剂前沿不齐，色谱结果也不易重复。
[3] 不得风吹及避免尘埃洒落，应放在水平的平板上室温下自然晾干，千万不要快速干燥，否则薄层板会出现裂痕。
为保证晾干充分，最好将铺好的薄板放置过夜后再活化。
[4] 把涂好的薄板置于室温自然晾干后，再放在烘箱内加热活化，进一步除去水分。
活化时需慢慢升温。
硅胶板一般在105～110℃的烘箱中活化0.5h即可。
氧化铝板在200℃烘4h可得到活性Ⅱ级的薄层板，１50～160℃烘4h可得到活性Ⅲ～Ⅳ级的薄层板。
活化后的薄板应保存在干燥器中备用。
[5] 试样也可选择间硝基苯胺、2，4二硝基苯胺。
[6] 本实验还可以用石油醚乙酸乙酯作为展开剂，V石油醚∶V乙酸乙酯=4∶1。
五、思考题
（1） 影响比移值Rf的因素有哪些?
（2） 影响薄板分离效果的因素有哪些?
（3） 展开剂的液面高出薄板的样点，将会产生什么后果?
（4） 用薄层色谱分析混合物时，如何确定各组分在薄板上的位置?如果斑点出现拖尾现象，可能的原因是什么？
一、实验目的
（1） 学习柱色谱的原理及其意义。
（2） 掌握柱色谱分离有机化合物的实验操作技术。
二、实验原理
柱色谱（n atography），又称柱层析，是通过色谱柱（层析柱）来实现分离、提纯少量有机化合物的有效方法。
常用的有吸附柱色谱和分配柱色谱两类，前者常用氧化铝和硅胶作固定相，后者则以附着在惰性固体（如硅藻土、纤维素等）上的活性**作为固定相（也称固定液）。
实验室中最常用的是吸附色谱，因此这里重点介绍吸附色谱。
**样品从柱顶加入，当溶液流经吸附柱时，各组分同时被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入洗脱剂洗脱，当洗脱剂流下时，由于固定相对各组分吸附能力不同，各组分以不同的速度沿柱下移，若是有色物质，则在柱上可以直接看到色带，如图249（a）所示。
继续用洗脱剂洗脱时，吸附能力最弱的组分随洗脱剂首先流出，吸附能力强的后流出，分别收集各组分，再逐个鉴定。
若是无色物质，可用紫外光照射，有些物质呈现荧光，可作检查，或在洗脱时，分段收集一定体积的洗脱液，然后通过薄层色谱（参见实验十二）逐个鉴定，再将相同组分的收集液合并在一起，蒸除溶剂，即得到单一的纯净物质。
如此，可将各组分分离开。
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